NY/T 3237-2018《猪繁殖与呼吸综合征间接ELISA抗体检测方法》

NY/T 3237-2018《猪繁殖与呼吸综合征间接ELISA抗体检测方法》基本信息

标准号：NY/T 3237-2018

中文名称：《猪繁殖与呼吸综合征间接ELISA抗体检测方法》

发布日期：2018-05-07    

实施日期：2018-09-01

发布部门：中华人民共和国农业农村部    

NY/T 3237-2018《猪繁殖与呼吸综合征间接ELISA抗体检测方法》介绍

中华人民共和国农业农村部于2018年5月7日发布了NY/T 3237-2018《猪繁殖与呼吸综合征间接ELISA抗体检测方法》，并于同年9月1日起实施。

一、标准适用范围

本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征抗体的间接酶联免疫吸附测定（Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，iELISA）方法。适用于猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测，可用于猪只的监测、免疫效果评估和流行病学调查。

二、样品采集与处理

本标准对样品的采集和处理提出了具体要求。样品应从健康的猪只身上采集，避免使用病猪或死亡猪的血液。血液样本应在使用前进行离心分离血清，并在2-8℃的条件下保存。血清样本应在采集后1周内进行检测，以保证结果的准确性。

三、试剂与设备

本标准对试剂和设备的选择提出了明确要求。试剂包括包被抗原、酶标记抗体、底物等，应选择质量稳定、特异性强的产品。设备包括酶标仪、离心机、微量移液器等，应保证操作的准确性和重复性。

四、操作步骤

本标准详细规定了iELISA的操作步骤，包括：

1、样品稀释：将血清样本进行适当稀释，以适应实验要求。

2、抗原包被：将PRRS病毒抗原固定在酶标板的孔中。

3、血清样本加入：将稀释后的血清样本加入到包被抗原的孔中，进行孵育。

4、洗涤：去除未结合的血清成分，减少非特异性反应。

5、酶标记抗体加入：加入特异性的酶标记抗体，与血清中的抗体结合。

6、再次洗涤：去除未结合的酶标记抗体，提高检测特异性。

7、底物加入：加入底物，使酶催化底物产生有色产物。

8、显色：在一定时间内观察颜色变化，以判断抗体的存在。

9、结果判定：根据显色程度，判断血清样本中PRRS抗体的阳性或阴性。

五、结果判定

本标准对结果的判定提出了具体方法。根据酶标仪测得的吸光度值（OD值），结合标准曲线，判定血清样本中PRRS抗体的存在与否。若OD值高于或等于判定界值，则判定为阳性；低于判定界值，则判定为阴性。

六、质量控制

为保证检测结果的准确性和可靠性，本标准提出了质量控制措施。包括：

1、试剂质量控制：定期对试剂进行质量检验，确保试剂的稳定性和特异性。

2、操作人员培训：对操作人员进行专业培训，提高操作技能和准确性。

3、室内质控：在每次实验中加入质控样本，监测实验过程的稳定性。

4、室间质评：参加室间质评活动，与其他实验室进行结果对比，确保结果的准确性。

NY/T 3237-2018《猪繁殖与呼吸综合征间接ELISA抗体检测方法》为猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测提供了标准化的方法和流程，有助于提高检测的准确性和可靠性。