DB45/T 749-2011《猪脑心肌病毒（EMCV）的检测 反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法》

DB45/T 749-2011《猪脑心肌病毒（EMCV）的检测  反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法》基本信息

标准号：DB45/T 749-2011

中文名称：《猪脑心肌病毒（EMCV）的检测  反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法》

发布日期：2011-09-20    

实施日期：2011-10-20

发布部门：广西壮族自治区质量技术监督局    

DB45/T 749-2011《猪脑心肌病毒（EMCV）的检测  反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法》介绍

DB45/T 749-2011《猪脑心肌病毒（EMCV）的检测  反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法》是广西壮族自治区质量技术监督局于2011年9月20日发布的一项地方标准。该标准旨在规范猪脑心肌病毒（EMCV）的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。自2011年10月20日起正式实施。

一、标准适用范围

本标准适用于猪脑心肌病毒（EMCV）的检测，包括病毒样本的采集、处理、反转录和聚合酶链反应（RT-PCR）等环节。通过规范检测流程，确保检测结果的准确性和可重复性。

二、样本采集与处理

1、样本采集：本标准规定了病毒样本的采集方法，包括采集部位、采集工具、采集时间等。采集部位应选择病毒含量较高的组织或体液，如脑、心肌、血液等。采集工具应无菌、无病毒污染，采集时间应尽量选择病毒复制活跃期。

2、样本处理：采集的样本应尽快进行处理，以减少病毒的降解和污染。处理方法包括研磨、离心、提取核酸等步骤。处理过程中应严格控制无菌操作，避免交叉污染。

三、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测

1、反转录：将病毒RNA模板逆转录为cDNA，为后续PCR扩增提供模板。反转录过程中应严格控制反应条件，如温度、时间、酶用量等，以保证反转录效率和准确性。

2、聚合酶链反应（PCR）：利用特异性引物对cDNA模板进行扩增，生成大量目标DNA片段。PCR过程中应严格控制反应条件，如温度、时间、循环次数等，以保证扩增效率和特异性。

3、结果分析：通过凝胶电泳、荧光定量等方法对PCR产物进行分析，判断病毒的存在与否。分析结果应结合临床症状、流行病学调查等综合判断，以提高检测的准确性。

四、质量控制

为保证检测结果的准确性和可靠性，本标准规定了质量控制措施。包括：

1、实验室环境：实验室应具备良好的通风、照明、无菌等条件，避免病毒污染和交叉污染。

2、操作人员：操作人员应具备相应的专业技能和资质，严格遵守操作规程，确保检测过程的规范性。

3、仪器设备：仪器设备应定期进行校准和维护，确保检测结果的准确性。

4、标准品和对照品：使用标准品和对照品对检测结果进行校准和验证，以提高检测的准确性和可重复性。

DB45/T 749-2011《猪脑心肌病毒（EMCV）的检测  反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法》标准为猪脑心肌病毒（EMCV）的检测提供了规范的操作流程和技术要求，有助于提高检测的准确性和可靠性。