酶联免疫吸附测定是什么

酶联免疫吸附测定是一种高灵敏度的固相免疫测定技术。它是将抗原或抗体结合到固相载体上，加入待测样本和相应的酶标记抗体或抗原，形成抗原抗体复合物，再通过酶催化底物显色反应检测。以下是对酶联免疫吸附测定的详细介绍。

一、ELISA检测原理

ELISA检测技术的核心原理是抗原-抗体反应。在实验中，首先将已知的抗原或抗体固定在固相载体（通常是塑料微孔板）上，然后加入待测样本。如果样本中含有目标分子（抗原或抗体），它们会与固相载体上的分子特异性结合。接着，加入酶标记的二抗体，该二抗体能够识别并结合到已经与固相载体上的一抗体结合的目标分子。加入酶的底物，酶催化底物产生颜色变化，通过光度计测定颜色变化的程度，从而间接测定目标分子的浓度。

二、ELISA检测类型

1、直接ELISA：直接将酶标记在抗原上，用于检测抗体。

2、间接ELISA：抗原固定在固相载体上，待测样本中的抗体与抗原结合后，再加入酶标记的二抗体。

3、夹心ELISA：使用两种不同的抗体，一种固定在固相载体上，另一种酶标记，用于夹住目标抗原。

4、竞争ELISA：待测样本中的抗原与固相载体上的抗原竞争结合酶标记的抗体。

三、ELISA操作步骤

1、固相抗原或抗体的包被：将已知的抗原或抗体固定在微孔板上。

2、封闭：用非特异性蛋白质封闭未结合的活性位点，防止后续步骤中的非特异性吸附。

3、样本加入：将待测样本加入微孔板中，让其与固相载体上的分子反应。

4、洗涤：去除未结合的样本成分，保留特异性结合的分子。

5、酶标记二抗体的加入：加入能够识别并结合到目标分子的酶标记二抗体。

6、再次洗涤：去除未结合的酶标记二抗体。

7、底物加入：加入酶的底物，酶催化底物产生颜色变化。

8、终止反应：加入终止液，使颜色变化不再发生。

9、光度测定：使用光度计测定颜色变化的程度，从而计算目标分子的浓度。

四、ELISA检测的优点

1、高灵敏度：ELISA能够检测到非常低浓度的分子。

2、高特异性：由于抗原-抗体反应的高度特异性，ELISA能够区分非常相似的分子。

3、操作简便：ELISA实验操作相对简单，易于标准化。

4、成本效益：与其他检测技术相比，ELISA的成本较低。

5、高通量：ELISA适合于大规模样本的检测。

五、ELISA检测的应用

1、疾病诊断：检测特定病原体的抗体或抗原，如HIV、乙肝等。

2、食品安全：检测食品中的有毒物质或过敏原。

3、药物研发：监测药物在体内的浓度。

4、环境监测：检测环境中的污染物。

5、农业：检测农作物中的农药残留。