DB45/T 1009-2014《家畜戊型肝炎病毒检测巢式反转录聚合酶链反应法》

DB45/T 1009-2014《家畜戊型肝炎病毒检测巢式反转录聚合酶链反应法》基本信息

标准号：DB45/T 1009-2014

中文名称：《家畜戊型肝炎病毒检测巢式反转录聚合酶链反应法》

发布日期：2014-05-25    

实施日期：2014-06-25

发布部门：广西壮族自治区质量技术监督局    

DB45/T 1009-2014《家畜戊型肝炎病毒检测巢式反转录聚合酶链反应法》介绍

广西壮族自治区质量技术监督局于2014年5月25日发布了《家畜戊型肝炎病毒检测巢式反转录聚合酶链反应法》（DB45/T 1009-2014），并于同年6月25日正式实施。

一、标准概述

DB45/T 1009-2014标准规定了家畜戊型肝炎病毒的检测方法，即巢式反转录聚合酶链反应法（Nest PCR）。该方法具有高灵敏度和特异性，适用于家畜血清、肝组织等样本中戊型肝炎病毒的检测。

二、巢式反转录聚合酶链反应法原理

巢式反转录聚合酶链反应法是一种基于核酸分子扩增的检测技术。该方法首先通过反转录酶将病毒RNA转录为cDNA，然后在cDNA上进行两轮PCR扩增，以提高检测的灵敏度和特异性。

三、标准适用范围

DB45/T 1009-2014标准适用于以下家畜的戊型肝炎病毒检测：

1、猪

2、牛

3、羊

4、鸡

四、样本采集与处理

1、血清样本：应采用无菌技术采集家畜血液，分离血清后进行检测。

2、肝组织样本：应从新鲜或冷冻的肝组织中提取病毒RNA进行检测。

五、检测方法

1、反转录：将病毒RNA转录为cDNA。

2、第一轮PCR：设计特异性引物对cDNA进行初步扩增。

3、第二轮PCR：使用第一轮PCR产物作为模板，设计嵌套引物进行二次扩增。

4、结果分析：通过凝胶电泳观察PCR产物，判断样本是否含有戊型肝炎病毒。

六、质量控制

1、使用阳性和阴性对照样本进行实验。

2、对试剂和设备进行定期校准和维护。

3、建立标准操作程序（SOP），确保实验操作的一致性和可重复性。

七、结果解释与报告

1、结果判定：根据PCR产物的有无和大小，判断样本是否含有戊型肝炎病毒。

2、结果报告：应详细记录实验条件、结果和并对结果进行解释。

DB45/T 1009-2014《家畜戊型肝炎病毒检测巢式反转录聚合酶链反应法》为家畜戊型肝炎病毒的检测提供了一种科学、准确的方法。通过严格的样本采集、处理和检测流程，以及有效的质量控制措施，可以确保检测结果的准确性和可靠性。