GB/T 28068-2011《柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法》

GB/T 28068-2011《柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法》基本信息

标准号：GB/T 28068-2011

中文名称：《柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法》

发布日期：2011-12-30

实施日期：2012-06-01

发布部门：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局  中国国家标准化管理委员会

提出单位：全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)

归口单位：全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)

起草单位：重庆大学、农业部农业技术推广服务中心、中华人民共和国北京出入境检验检疫局

起草人：王中康、殷幼平、王福祥、高文娜、夏玉先、李正国、曹月青

中国标准分类号：B16植物检疫、病虫害防治

国际标准分类号：65.020.01农业和林业综合

GB/T 28068-2011《柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法》介绍

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局和中国国家标准化管理委员会联合发布了GB/T 28068-2011《柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法》标准，该标准是一项国家推荐性标准，于2011年12月30日发布，并于2012年6月1日正式实施。

一、样本采集与制备

样本的采集是检测工作的第一步，也是保证检测结果准确性的关键。标准规定了样本的采集对象、采集方法和采样量。样本采集对象包括柑桔的叶片、果实和枝条等，采集方法应避免污染，确保样本的代表性。样本采集后，应尽快进行制备，减少核酸降解的可能性。

二、核酸提取

核酸提取是实时荧光PCR检测的基础。标准规定了核酸提取的方法和条件，包括提取试剂的选择、提取步骤和提取效率等。核酸提取过程中，应严格控制操作条件，避免核酸的降解和污染，保证提取的核酸质量和数量。

三、实时荧光PCR扩增

实时荧光PCR扩增是检测柑桔溃疡病菌的关键步骤。标准规定了PCR反应体系的组成、扩增程序和荧光检测方法。PCR反应体系包括引物、探针、DNA聚合酶和缓冲液等，扩增程序包括预变性、变性、退火和延伸等步骤。荧光检测方法采用荧光标记的探针，实时监测PCR扩增过程中的荧光信号变化，实现对目标DNA的定量检测。

四、结果分析

结果分析是判断样本是否感染柑桔溃疡病菌的最终环节。标准规定了结果分析的方法和标准，包括阈值设定、Ct值计算和阳性判断等。阈值设定是确定阳性和阴性的临界值，Ct值计算是评估样本中目标DNA的相对含量，阳性判断是综合阈值和Ct值的结果，判断样本是否感染柑桔溃疡病菌。

五、标准的应用与推广

GB/T 28068-2011《柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法》标准的发布和实施，为柑桔溃疡病菌的检测提供了标准化、规范化的方法，提高了检测的准确性和效率。该标准的应用和推广，有助于加强柑桔溃疡病的防控，保障柑桔产业的健康发展，提高我国柑桔在国际市场的竞争力。